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普洱-楚雄石斛小杯苗培育基地研究以金線蓮組培苗莖段為試材，采用「二加二」法，即「兩步誘導(dǎo)」（1. 利用暗培養(yǎng)誘導(dǎo)出白化莖段；2. 由白化莖段誘導(dǎo)類原球莖）加「兩步增殖」（賣株洲的金線蓮和鐵皮石斛種苗批發(fā) 攸縣市場(chǎng)價(jià)錢多少錢一珠新誘導(dǎo)的類原球莖在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng) 3 周；2. 利用 L16（45）正交試驗(yàn)優(yōu)選增殖培養(yǎng)方案）的方法，研究外植體來(lái)源、外植體處理方式、普洱-楚雄石斛小杯苗培育基地暗培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基及附加成分對(duì)類原球莖誘導(dǎo)的影響，以及培養(yǎng)時(shí)間、光照強(qiáng)度、紫外光照射時(shí)間對(duì)類原球莖增殖的影響，并比較「二加二」法與傳統(tǒng)單步法的培養(yǎng)效果。結(jié)果表明，適宜白化莖段誘導(dǎo)類原球莖的培養(yǎng)基為 MS + 2.5 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA +1.0 mg/L S3307。
利用怒江-臨滄金釵石斛叢生苗「二加二」法建立了金線蓮類原球莖高效培養(yǎng)新體系，該體系誘導(dǎo)率、初始材料擴(kuò)大倍數(shù)、增殖倍數(shù)均高于傳統(tǒng)單步誘導(dǎo)法。92% 的類原球莖能夠穩(wěn)定增殖，不發(fā)生分化和愈傷組織化。此途徑應(yīng)用較廣，但仍存在許多問(wèn)題：如初代誘導(dǎo)困難，誘導(dǎo)率低[8， 11-12]。王建勤等[12]利用莖節(jié)做接種材料誘導(dǎo)率僅為 66%。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 植物材料 金線蓮品種為「福建尖葉」，怒江-臨滄金釵石斛叢生苗帶根組培植株采購(gòu)于福建金草公司，切取莖段后在本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)連續(xù) 1 a 的繼代培養(yǎng)，獲得長(zhǎng)勢(shì)基本一致的金線蓮組培繼代植株。1.1.2 試劑 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 6-芐氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA）、萘乙酸（1-Naphthaleneacetic acid，NAA）、玉米素（Zeatin，ZT）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4- Dichlorophenoxyacetu001fic acid，2，4-D）。
